联合应用重组TPO和G-CSF对骨髓抑制性小鼠外周血小板及白细胞恢复的影响

造血型急性放射病的病理变化主要为造血系统衰竭,由此引起的严重出血与感染是死亡的主要原因之一。此外,肿瘤放疗与化疗的造血抑制是影响疗效的重要因素,一旦造成出血和感染,对病人可能造成严重后果。近年来,造血因子治疗血细胞减少症的潜力引人关注,重组人血小板生成因子(recombinant human thrombopoietin, rhTPO)和重组人巨噬细胞刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor, rhG-CSF)都具有一定的髓系特异性,前者主要作用于巨核细胞系,后者主要作用于粒细胞系。各类血细胞的生长发育过程需要多个细胞因子的协同作用,研究单一因子并不能完全而真实地反映其生理作用,因此,研究rhTPO和rhG-CSF联合治疗血细胞减少症很有必要。     

γ射线联合HSV-tk/GCV基因治疗系统抗肿瘤体外实验研究

目的研究γ射线与人单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）／丙氧鸟苷（GCV）基因治疗系统联合应用对Lewis肺癌细胞的杀伤作用及其可能机制。方法以脂质体介导法将含HSV—tk基因的真核表达质粒体外转染小鼠Lewis肺癌细胞，建立稳定表达的细胞株；RT-PCR检测细胞tk基因表达；Hoechst33258/PI荧光活染、流式细胞术检测γ射线与HSV-tk／GCV系统单独及联合作用下的细胞凋亡；集落形成法检测细胞存活曲线，反映放射敏感性变化；同时检测旁观者效应及γ射线对该效应的影响。结果HSV-tk／GCV系统对转染基因的Lewis细胞（Lewis-Hytk细胞）具有选择性杀伤作用。γ射线与HSV-tk／GCV系统联合应用可使Lewis-Hytk细胞的凋亡和坏死率显著高于二者单独作用之和。0．1μg/ml GCV可使Lewis-Hytk细胞的放射敏感性明显增高（SER=1．47）。γ射线可增强HSV-tk/GCV系统的旁观者效应，二者联合作用后的Lewis-Hytk细胞的培养液对未处理过的Lewis细胞具有杀伤作用。结论γ射线与HSV-tk／GCV系统联合应用对Lewis肺癌细胞具有协同杀伤效应。γ射线增强HSV—tk／GCV系统的旁观者效应可能是其协同效应产生的机制之一．     

2000年以来放射增敏剂(化学合成剂和基因治疗剂)概览

IntroductionRadiotherapyhasplayedanimportantroleintreat mentoftumorpatientssinceitappearedabout 80yearsago ,andhasbeenanindispensablepartofthemanage mentofabout 5 0 %oftumors (especially 6 0 % - 70 %ofmalignanttumors) .Currently ,radiotherapyisusedinsimpleandpalliativetherapy ,adjuvanttherapyafterorbeforesurgery ,simultaneousradio chemotherapy ,com binedBRM (biologicalresponsemodifier)therapy ,ets ..Radiosensitizingagentsenhancetheradiationeffectsontumorcellssoastohavebetterresponsesinradioth…     

HPV18E6基因沉默对宫颈癌Hela细胞生长和凋亡的影响

目的：观察RNA干扰法沉默HPV18E6基因表达对宫颈癌Hela细胞牛长和凋亡的影响，探索宫颈癌基因治疗的新途径。方法：针对HPV18E6 mRNA序列合成一对60bp的编码siRNA的DNA模板和一对60bp的非特异性对照DNA模板，构建pSUPER—siRNA和pSUPER—com重组质粒，瞬时转染Hela细胞；采用RT—PCR法检测质粒转染后细胞HPV18E6基因表达的变化，用蛋白免疫印迹法检测转染后Hela细胞p53、p21、Bcl-2和Bax蛋白表达变化，以细胞计数法检测细胞生长情况，Hoechest／PI双荧光活细胞染色法检测细胞凋亡。结果：pSUPER—siRNA质粒转染能有效降低HPV18E6在mRNA水平的表达，转染后48小时，抑制效率达70％以上；转染后细胞053、p21和Bax蛋白表达显著增加，Bcl-2蛋白表达减少。RNA干扰法沉默HPV18E6基因表达后，Hela细胞增殖受到明显抑制，细胞凋亡率明显增加。结论：pSUPER—siRNA质粒转染可有效抑制HPV18E6在人宫颈癌Hela细胞中的表达，抑制Hela细胞生长并促进其凋亡。以HPV18E6为靶点的RNA干扰技术可望成为宫颈癌基因治疗的新途径。     

2000年以来天然放射增敏剂概览

IntroductionActually ,radiationaloneisnotenoughtokilltumorcellsefficientlybecauseoftheradioresistanceoftumorcells .Itiswellknownthattumorsfromthesamehistolog icaloriginandofthesamedevelopmentstageareextreme lyheterogeneousintheirsensitivitytoradiotherapy .Oneofthemostresistantfactorstoradiationisthattumorcellsarecommonlyhypoxic .Thestudyonradiosensitizingagentsisoneofthemostinterestingissuesintumorradiotherapeutics .Theseradiosensitizingagentscanbeclassifiedintothreemaincategories:naturalprod…     

辐射诱发细胞凋亡4种定量检测方法的比较

目的 通过检测结果的比较和原理分析，提示4种凋亡检测方法鉴别凋亡和坏死的能力及优缺点。方法 采用PI染色-流式细胞测量(P-F)法、TUNEL标记-流式细胞测量(T-F)法、Annexin V-FITC／PI活染-流式细胞测量(A-F)法和Hoechst／PI活染-荧光显微镜观察(H-O)法对γ射线诱发的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和坏死进行检测，以羟基喜树碱和叠氮钠分别为诱发凋亡和坏死的阳性对照物。结果 4种方法对γ射线、羟基喜树碱诱发的细胞凋亡显示良好的时间-剂量依赖性响应。P—F法所得凋亡率较低，曲线斜率最小；T-F法反之；A—F法和H—O法可获得凋亡和坏死两套数据，且两种方法的数值相近。A-F法和H-O法可识别叠氮钠所致的细胞坏死；而P-F法和T-F法不能反映其致坏死为主的真实情况。结论 P-F法和T-F法不能区别凋亡和坏死，A-F法和H-O法可以区别。P-F法较T-F法灵敏度低但简便经济。A-F法快速可靠，H-O法经济实用并可同时观察细胞形态学变化。     

喹喔啉双氮氧化物衍生物QN-2013的乏氧细胞毒性和放射增敏作用

目的：检验和评价喹喔啉双氮氧化物衍生物QN-2013的选择性乏氧细胞毒性和放射增敏作用。方法：体外细胞毒性、放射增敏作用及体内抗肿瘤活性,分别用集落形成法和肿瘤生长延迟法检验。细胞周期的变化、DNA损伤和损伤DNA的修复分别以流式细胞术和“彗星”分析法测定。结果：QN-2013对乏氧和富氧HeLa-S3细胞的等毒性浓度ICN250和ICair50分别是0.08和1.7 mmol*L－1,乏氧细胞毒性比率(hypoxic cytotoxicity ratio, HCR)为21。这说明QN-2013具有一定的乏氧细胞毒性,但弱于代表性生物还原药SR-4233。在1 mmol*L－1以下时,QN-2013的体外放射增敏作用比MISO(misonidazole)弱,但随药物浓度增加近似按指数增大,而荷瘤小鼠腹腔给药则体内增敏作用与施药剂量无明显依赖关系。在细胞和分子水平上,QN-2013诱发乏氧HeLa-S3细胞G2M期阻断,引起DNA双链断裂,且抑制辐射DNA损伤的修复。结论:QN-2013是一中度活性的乏氧选择性细胞毒剂,体内外实验表明具有一定的放射增敏作用,明显增强辐射抗肿瘤能力。其作用机制可能是通过直接损伤DNA和抑制DNA修复。这些结果提示虽QN-2013本身可能不是理想的生物还原药,但喹喔啉氮氧化物系列不失为探索新抗癌药应重视的领域之一。     

男童垂体-性腺轴激素遗传效应的双生子分析

目的 :分析男童垂体促性腺激素 (LH、FSH)和性类固醇激素 (T、E2 )的遗传度 ,探讨遗传因素对青春期前垂体 性腺轴激素的相对效应。　方法 :5 1对 5～ 11岁男性双生子 (35对同卵双生子、16对异卵双生子 )以短串联重复序列基因扫描和分型技术作卵型鉴定 ,用放射免疫法测定血清激素 ,以组内相关系数法分析各激素遗传度。　结果 :各激素组内相关系数同卵双生大于异卵双生 ;各激素遗传度分别为 :LH 0 .5 1,FSH 0 .32 ,T 0 .81,E2 0 .4 1。结论 :遗传因素对青春期前男童垂体 性腺轴激素有重要影响。     

儿童青少年双生子胰岛素敏感性的遗传度估计及影响因素分析

目的:分析影响儿童青少年的胰岛素敏感性的遗传和环境因素,并探讨其中体质指数(body mass index, BMI)、年龄和性别的作用.方法:选择5～18岁同性别双生子296对,平均年龄(12.4±3.5)岁,其中同卵双生子(MZ)223对,异卵双生子(DZ)73对.在DNA卵性鉴定基础上,应用Mx软件模型拟合分别计算BMI调整前后稳态模型胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment insulin resistance index, HOMA IR)和β细胞功能指数(HOMA β-cell function index,HBCI)的遗传度,并检验年龄和性别对于模型的作用.结果:HOMA IR与年龄、性别和BMI相关,HBCI与年龄相关,遗传分析HOMA IR、HBCI的模型为ACE,BMI调整前后HOMA IR男女生遗传度不同,HBCI无明显变化.调整后HOMA IR、HBCI遗传度分别为0.25、0.24.结论:儿童青少年人群中HOMA IR、HBCI受遗传和环境因素共同作用,环境因素的影响似乎更大;BMI是影响机体胰岛素敏感性的重要因素;年龄和性别对遗传度的影响可能不大.